Durchflusszytometrie

Mit dieser Analysemethode können lebende Zellen und Zellgemische (z.B. Blutleukozyten) in Suspension analysiert werden.

1. Inkubation des Zellgemisches mit monoklonalen AK, die mit verschiedenen Floureszenzfarbstoffen markiert sind.
2. Die MoAk binden nun an die entsprechenden Oberflächenantigene der Zellen, z.B.
   MoAK gegen CD3 (grün)
   MoAK gegen CD4 (rot)
3. Dann werden die Zellen durch ein Analysegerät gesaugt, wo durch Laserstrahlung Fluoreszenz angeregt wird. entsprechend der Farbreaktion werden die Zellen dann (elektrostatisch) in Fraktionen aufgeteilt:

• Zellen, die nur grün aufleuchten ==> CD3⁺ CD4^- müssen wohl CD8⁺-T-Zellen sein.
• Zellen, die rot und grün leuchten ==> CD3⁺ CD4⁺ müssen T_H-Zellen sein.
• Zellen, die nur rot aufleuchten ==> CD3^- CD4⁺ müssen Zellen sein, die keinen TCR tragen (also keine T-Lymphozyten), die aber trotzdem CD4⁺ sind ==> einige Monozyten
• Zellen, die gar nicht aufleuchten: alle anderen Blutzellen

Moderne FACS-Geräte können 3 und mehr Farben analysieren.

Anhand der Intensität der Fluoreszenzreaktion kann auf die Dichte der exprimierten Oberflächenantigene geschlossen werden (sogar innerhalb einer Fraktion).

Außerdem können von den FACS-Geräten auch Größe und Granularität der Zellen erfasst werden.

Einsatzgebiete:

• Analyse der Zusammensetzung der Blutzellpopulationen
• Diagnostik von hämatologischen Erkrankungen, z.B. Bestimmung der CD4/CD8-Ratio bei HIV-Infektionen.